Etablierung zellulärer Testsysteme zur Untersuchung Kardiomyopathie-assoziierter \(\it RBM20\)-Mutationen in HL1- Zellen und murinen embryonalen Stammzellen (CM7/1) mittels CRISPR-Cas9
- Es sind >80 krankheitsassoziierte Gene der DCM bekannt, u.a. das für einen alternativen Spleißfaktor codierende \(\it RBM20\). Der Einfluss der Aminosäurepositionen innerhalb der RS-Domäne auf die Kernlokalisation des \(\it RBM20\) wurde anhand von EYFP-Proteinchimären untersucht. \(\it RBM20\) wurde in HL1- und CM7/1-Zellen mittels spezifischer Cas9-codierender Vektoren modifiziert. Die relative Quantifizierung des \(\it RBM20\) und RBM20-\(\it Splicing\) Targets erfolgte mittels RT-qPCRs. Die Fehllokalisation Kardiomyopathie-assoziierter Varianten wurde bestätigt. Die hetero- und homozygoten HL1-Mutanten wiesen signifikant erniedrigte relative Expressionen des \(\it RBM20\), \(\it Ttn-N2B\) und wildtypischen \(\it Ryr2\) auf. Die CM7/1-Mutante zeigte eine signifikant höhere relative \(\it RBM20\)-mRNA-Expression. CM7/1-Zell-Karyotypanalysen zeigten chromosomale Anomalien. Die generierte \(\it compound\) heterozygote CM7/1-Mutante ist nicht als Testsystem geeignet. Eine Nutzung der homozygoten HL1-Mutante als Testsystem ist mit Limitierungen möglich.
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| Author: | Hans EbbinghausGND |
|---|---|
| URN: | urn:nbn:de:hbz:294-84864 |
| DOI: | https://doi.org/10.13154/294-8486 |
| Referee: | Hendrik MiltingORCiDGND, Bernd StratmannGND |
| Document Type: | Doctoral Thesis |
| Language: | German |
| Date of Publication (online): | 2022/02/07 |
| Date of first Publication: | 2022/02/07 |
| Publishing Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek |
| Granting Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Medizinische Fakultät |
| Date of final exam: | 2021/12/14 |
| Creating Corporation: | Medizinische Fakultät |
| GND-Keyword: | Herzmuskelkrankheit; RNS-Bindungsproteine; Kongestive Herzmuskelkrankheit; Chromosomenanomalie; Spleißfaktor |
| Institutes/Facilities: | Herz- und Diabeteszentrum NRW, Klinik für Thorax- und Kardiovaskularchirurgie |
| Erich und Hanna Klessmann-Institut für kardiovaskuläre Forschung und Entwicklung | |
| Dewey Decimal Classification: | Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften / Medizin, Gesundheit |
| faculties: | Medizinische Fakultät |
| Licence (German): |  Creative Commons - CC BY 4.0 - Namensnennung 4.0 International |
