RUB » Bibliotheksportal

Andrey Turchinovich

• In this work we explored an RNA interference strategy for functional studies of the gap junction protein Cx43. The major interest of the project was the question if the Cx43 can be used as a target for the prevention of glial scarring. We found that acute knockdown of the Cx43 in cultured astrocytes correlated with the decreased proliferation rate of the cells. In addition, Cx43 impaired astrocytes showed significantly enhanced migration and lower adhesion capacity in vitro. Secondly, we have tested a number of strategies to deliver synthetic siRNA into the mouse retina in vivo. We had shown that under specific protocol siRNA conjugated with Transit-TKO transfection reagent was able to penetrate into the ganglion cell layer of mouse retina. Moreover, siRNA was localized within the retinal astrocytes network. The ultimate goal would be to study the functional effect of the siRNA mediated Cx43 downregulation on glial scar formation in a retina model of neurotrauma.
• In dieser Arbeit wurde eine auf RNA-Interferenz (RNAi) basierende Methode für die funktionelle Charakterisierung des \(\textit {gap junction}\) Proteins Connexin43 (Cx43) entwickelt. Das Hauptinteresse galt der Frage, ob Cx43 eine Zielstruktur im Prozess der glialen Narbenbildung (\(\textit {glial scarring}\)) darstellt. Wir haben herausgefunden, dass die RNAi vermittelte Herabregulation von Cx43 in kultivierten Astrocyten deren Proliferationsrate verringert. Zudem zeigten mit siRNA behandelte Astrocyten eine verstärkte Migration und geringere Adhäsion \(\textit {in vitro}\). Daneben wurde eine Reihe von Bedingungen getestet, um siRNA gezielt in der Mausretina zu applizieren. Das optimierte Protokoll, in dem die siRNA mit dem Transit-TKO Transfektionsreagenz komplexiert wurde, sorgt für eine Diffusion der Komplexe bis zur Ganglien-Zellschicht der Retina, einschließlich astrocytärer Netzwerke. Das etablierte Protokoll schafft die Grundlage für \(\textit {in vivo}\) Studien an der Mausretina, die ein Modell für \(\textit {glial scarring}\) ist.