RUB » Bibliotheksportal

Franziska Christine Hundt

• The coordination of the intracellular vesicular transportation is organized by more than 60 different Rab GTPases in humans. For studying Rab GTPases in proteomics, enrichment strategies are required for mass spectrometric analysis of this protein family. In this study, different enrichment strategies of Rab GTPases from cultured human cell lines were tested and analyzed by different mass spectrometry-based label-free quantitation methods. In the first strategy, enrichment was attempted via Rab GTPases’ prenyl anchors. The second approach was done by affinity chromatography coupled to mass spectrometry using the Rab GTPase-interaction partner REP-1. Using this strategy, a so far unknown potential interaction partner of REP-1 was identified. In the third and last strategy, Rab GTPases were determined with high intensities in enriched Golgi membranes. Furthermore, this approach was successfully used to determine the subcellular localization of prenylated and non-prenylated Rab GTPases.
• Mehr als 60 verschiedene Rab GTPasen regulieren den intrazellulären vesikulären Transport im Menschen. Um Rab GTPasen proteomisch mittels Massenspektrometrie zu untersuchen, ist eine spezifische Anreicherung notwendig. In dieser Arbeit wurden verschiedene Anreicherungsstrategien von Rab GTPasen aus humanen Zelllinien getestet und mit verschiedenen markierungsfreien massenspektrometrischen Quantifizierungsmethoden analysiert. Mit der ersten Strategie sollte die Anreicherung über die Prenylanker der Rab GTPasen erfolgen. Mithilfe der zweiten Strategie wurden Rab GTPasen affinitätschromatographisch über die Protein-Protein Interaktion mit REP-1 angereichert. Hierbei wurde außerdem ein bisher unbekannter potenzieller Interaktionspartner des REP-1 identifiziert. In der letzten Strategie wurden Rab GTPasen über die Präparation des Golgi-Apparates nachgewiesen. Mit dieser Methode konnte zusätzlich die subzelluläre Lokalisation von prenylierten und unprenylierten Rab GTPasen gezeigt werden.